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分子生物學中用液氮研磨組織方法

作者:admin日期:2022-02-10閱讀

分子生物學是當前生命科學領域的學科,其理論與技術已進入到各學科領域,而分子生物學實驗在生命學科中顯得相當重要。在實際工作中,許多實驗材料比如動物身上的肌肉組織、結締組織、骨組織、毛發組織等,植物的根、莖、葉、種子等均需磨碎,隨后才能對其成分、與蛋白質及結構和功能進行研究。


利用液氮研磨組織法在分子生物學實驗中應用廣

泛,特別是有關核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)的分離。液氮的溫度為一196℃,它既能使各種組織成分不易被破壞或降解,又能使組織變硬,脆性增加易于磨碎。正是由于液氮的溫度極低,操作時要特別小合。為此,我們摸索總結了一套簡便而行之有效的方法。



1液氮容器的準備

液氮一般保存于液氮罐中。實驗前先準備一個保溫桶,將適量液氮轉移至保溫桶中,同時還要準備一個不銹鋼或塑料湯勺,湯勺的柄不夠長時要想辦法加長,以免傷手。


2組織的處理及用量

任何組織在獲得后如不立即使用,要盡快保存在低溫環境中一196℃液氮中速凍,一70℃保存。使用時,植物組織應當先用自來水清洗外表的泥沙,用單蒸水沖洗兩遍,用乙醇浸洗約秒,再用除菌雙蒸水沖洗兩遍,用無菌濾紙吸干,然后根據需要取適當部位的組織。動物組織不必清洗,但要盡量剔除周邊的組織及血塊。組織的取量要比實際需要量大一倍,因為研磨時部分組織會粘在研缽和研棒上,會致部分組織樣本丟失。


3研缽的固定

我們在實驗時發現,研缽在加液氮后溫度很低,外表會形成許多冰晶,用力研磨組織時易打滑,研缽內的組織液氮混合物很容易濺出,造成組織丟失,也容易傷手。如果在研缽下墊些紗布或濾紙,雖不易滑動,但由于緩沖作用,研磨時不受力,不足取。后來我們作了如下改進一是做個木支架,即選一塊厚約兩寸的木板,在上面挖個半球形圓洞大小根據研缽大小而定,木板兩端留一定長度以備手握之用,使用時將研缽卡在半球形洞中,既穩當又不會傷手二是備一條干凈的毛巾或紗布干的,折成長條形,將研缽包圍起來,兩端合并后用手抓住,這個方法簡單實用,但要特別小心,以免傷。


4研磨方法

空缽先用液氮預冷,再將研棒的上端用紗布包裹用力時手不會痛,組織建議切成薄片,研磨時不易濺出,也更容易磨碎,研棒建議頂著手心,這樣便于用力。研磨過程中要避免液氮干涸,研磨至細粉即可。待液氮剛蒸發完時,用一個小藥勺取出所需用量進行下一步實驗,或者將組織粉末裝人容器內,保存于一70℃的溫度下,以備下一步實驗使用。

使用得當的液氮研磨組織法,將為下一步實驗成功奠定了基礎。值得一提的是,操作中所有接觸的器皿及耗材須清洗干凈并。如果研磨組織用于提取時,使用的器皿及耗材必須采用焦碳酸二乙醋滅活RNase并進行高壓處理。


5研磨球

建議使用氧化鋯珠,磨耗低,屬于陶瓷球,不含重金屬,研磨效率高。


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